1.測試菌種的選擇

　　測試的菌種包括各種細菌和真菌。在細菌中主要用革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌，在真菌中主要用霉菌和癬菌。

　　在紡織品抗菌面料抗菌性能的評價中,菌種的選擇必須具有科學(xué)性和代表性。金黃色葡萄球菌是無芽胞細菌中抵抗力強的致病菌,可作為革蘭氏陽性菌的代表。巨大芽胞桿菌是芽胞類細菌中常見的致病菌;易形成芽胞,抵抗力強,可作為芽胞菌的代表。大腸桿菌分布相當(dāng)廣泛,已作為通常的革蘭氏陰性菌的代表性菌種用于各種試驗。黃曲霉、球毛殼霉作為規(guī)定的防霉試驗用菌種,已列入我國國家標(biāo)準(zhǔn)(GB2423.16-81),其他一些所選擇的霉菌,則是侵蝕紡織品或高分子材料的常見霉菌。白色念珠菌是人體皮膚粘膜常見的條件致病性真菌,對藥物具有敏感性,具真菌的特性,菌落酷似細菌而不是細菌又不同于霉菌,因具有酷似細菌的菌落,易于計數(shù)觀察,常作為真菌的代表。

　　因此,為考核紡織品抗菌面料是否具有廣譜抗菌效果,較合理的選擇是按一定的比例,將有代表性的菌種配成混合菌種用于檢測。目前大部分抗菌產(chǎn)品的抗菌性能,往往僅選擇金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和白色念珠菌分別作為革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌和真菌的代表。但實際上僅用這三種菌來代表織物的抗菌性能是遠遠不夠的。

　　另外,由于大部分真菌無法計數(shù)菌落數(shù),因此,紡織品抗真菌性能的評價主要通過觀察試樣接觸真菌后,在一定的溫濕度的條件下,經(jīng)過一定時間以后真菌在試樣上的生長情況來評定,而對真菌生長程度的評定,則采用英國標(biāo)準(zhǔn)BS6085-81來進行等級評定。

　　2.紡織品抗菌性能測試方法

　　紡織品抗菌面料性能測試方法主要包括定性測試方法、半定量測試方法和定量測試方法。

　　2.1定性測試方法

　　定性測試方法主要有美國AATCC Test Method90(Halo Test,暈圈法,也叫瓊脂平皿法)、JISZ2911-1981(抗微生物性實驗法)、AATCC-30(紡織材料抗霉菌和抗腐爛性能的評定)以及GB/T 20944.1-2007(紡織品抗菌性能的評價第1部分：瓊脂平皿擴散法)等。定性測試方法包括在織物上接種測試菌和用肉眼觀察織物上微生物生長情況。它是基于離開纖維進入培養(yǎng)皿的抗菌劑活性,一般適于溶出性抗菌整理,但不適用于耐洗滌的抗菌整理。優(yōu)點是費用低,速度快,缺點是不能定量測定抗菌活性,結(jié)果不夠準(zhǔn)確。

　　2.1.1AATCC-90試驗法

　　是用于抗菌劑篩選的抗菌效力快速定性方法。原理是:在瓊脂培養(yǎng)基上接種試驗菌,再緊貼試樣。于37℃下培養(yǎng)24 h后,用放大鏡觀察菌類繁殖情況和試樣周圍無菌區(qū)的暈圈大小,與對照樣的試驗情況比較。此法一次能處理大量的試樣,操作較簡單,時間短。但也存在一些問題,如雖然規(guī)定了在一定時間內(nèi)培養(yǎng)試驗菌液,但是菌濃卻沒有明確的規(guī)定。另外,阻止帶的寬度代表的是擴散性和抗菌效力,對于與標(biāo)準(zhǔn)織物比較是有意義的,但不能作為抗菌活力的定量評定。

　　2.1.2AATCC-90噴霧法

　　AATCC-90噴霧法是對AATCC-90試驗法改良之一，是在培養(yǎng)后的試樣噴撒一定量TNT試劑,肉眼觀察試樣上菌的生長情況。其發(fā)色原理為TNT試劑因試驗菌的琥珀酸脫氫酶的作用被還原,生成不溶紅素而顯紅色,從而達到判定抗菌性的目的。該種方法的優(yōu)點就是無論試樣是否有抑菌圈形成,只要平板上有細菌生長,就會顯出紅色。

　　2.1.3AATCC-90比色法

　　AATCC-90比色法也是對AATCC-90試驗法改良，是在培養(yǎng)后試樣上的菌洗出液中加入一定量的TNT試劑使發(fā)色,15 min后用分光光度計測定525nm處的吸光度,來求出活菌個數(shù)。但是以上兩方法不適用于無琥珀酸脫氫酶的試驗菌。

　　2.1.4 J ISZ2911抗霉菌試驗法

　　該法是條研究思路在霉菌檢測中的早期成果,其基本原理是:在樣品及培養(yǎng)基上均勻地噴灑一定量的混合孢子懸液,培養(yǎng)一定時間,定期觀察試樣長霉情況,按霉菌的生長情況分等級評價試樣的抗霉菌性能。

　　2.1.5AATCC 30試驗法

　　AATCC-30是對紡織材料抗霉菌和抗腐爛性能的評定。確定了紡織材料抵抗霉菌和耐腐爛的性能,以評定殺菌劑對紡織材料抗菌性能的有效性。分為土埋法、瓊脂平板法及濕度瓶法等幾種方法。土埋法是指將樣品(具有一定尺寸)埋在泥中一定時間后,測定樣品的斷裂強度。此法是用樣品經(jīng)土埋處理后所損失的斷裂強度來表征其抗霉能力。瓊脂平板法是用來評估織物抵抗這類細菌能力的方法。該法是將含有培養(yǎng)基的瓊脂平板均勻滴上一定量的分散有曲霉菌孢子的水溶液,然后將經(jīng)非離子潤濕劑處理的樣品圓片放置其上,并在樣片上均勻滴加一定量的上述水溶液,在一定的溫度下放置一段時間,后觀察樣品上霉菌的生長情況。它是用樣品圓片上的霉菌面積來進行表征的。濕度瓶法是經(jīng)過預(yù)處理的樣品條懸掛置于一個有一定通風(fēng)的，盛有一定量的，分散有一定數(shù)目細菌孢子的水溶液的廣口瓶中,在一定的溫度下放置一段時間。此法也是用樣品條上的霉菌面積進行表征。

　　2.1.6 GB/T 20944.1-2007紡織品抗菌性能的評價

　　第1部分：瓊脂平皿擴散法

　　此標(biāo)準(zhǔn)是國內(nèi)新推出的紡織品抗菌性能定性測試方法，平皿內(nèi)注入兩層瓊脂培養(yǎng)基，下層為無菌培養(yǎng)基，上層為接種培養(yǎng)基，試樣放在兩層培養(yǎng)基上，培養(yǎng)一定時間后，根據(jù)培養(yǎng)基和試樣接觸處細菌繁殖的程度，定性評定試樣的抗菌性能。

　　2.2半定量測試法

　　紡織品抗菌性能半定量測試法中應(yīng)用的較多的是平行劃線法。

　　平行劃線法是對紡織品抗菌效力的半定量實驗方法,可相對快速和方便地定性測試經(jīng)抗菌整理的紡織材料的抗菌性能,可用來確定具有可擴散抗菌劑的紡織品的抗菌能力。替代了繁瑣的A A T C C-1 00。

　　AATCC-147應(yīng)用于紡織材料的抗菌整理的評定,是對紡織材料抗菌性能的半定量分析。AATCC-147法是將一定量的培養(yǎng)液(內(nèi)含一定數(shù)目的金黃色葡萄球菌等細菌的孢子)滴加于盛有營養(yǎng)瓊脂平板的培養(yǎng)皿中,使其在瓊脂表面形成五條平行的條紋,然后將樣品垂直放于這些培養(yǎng)液條紋上,并輕輕擠壓,使其與瓊脂表面緊密接觸,在一定的溫度下放置一定時間。此法是用與樣品接觸的條紋周圍的抑菌區(qū)的寬度來表征織物的抗菌能力。

　　2.3定量測試法

　　目前紡織品抗菌性能定量測試方法主要的就是燒瓶振蕩法和吸收法。燒瓶振蕩法是通過紡織品在菌液中的振蕩,使細菌與紡織品所含有的抗菌劑接觸,根據(jù)振蕩前后菌液中所含活菌個數(shù)的變化,作為抗菌性能的主要指標(biāo)。而吸收法是將含有規(guī)定濃度的菌液滴加于紡織品抗菌面料試樣和不含抗菌劑的對照樣上,在規(guī)定條件下培養(yǎng)一定時間后,對培養(yǎng)前后的試樣和對照樣分別用規(guī)定的洗脫液進行洗滌,之后再對洗脫液中的活菌記數(shù)。通過對比培養(yǎng)前后活菌個數(shù)的變化,來評價抗菌性能。

　　振蕩法操作相對復(fù)雜,一般的標(biāo)準(zhǔn)中應(yīng)用范圍也僅限于非溶出型紡織品抗菌面料;而雖然吸收法的操作較為復(fù)雜,耗時較長,但因其是定量方法,對溶出型與非溶出型紡織品抗菌面料均較適用,且試驗條件與人體實際穿著情況較為接近,所以是目前測試結(jié)果為準(zhǔn)確的方法。從科學(xué)性以及生活實際出發(fā),該法都應(yīng)該是未來紡織品抗菌性能測試的主要發(fā)展方向。

　　定量測試的標(biāo)準(zhǔn)主要包括以下幾種，美國AATCCTest Method 100(菌數(shù)測定法)、J ISL1902-8(1998)定量試驗法、FZ/T02021-92、改良的奎因(Quinn)實驗法、ASTM E 2149—2001(固著性抗菌劑抗菌性的動態(tài)測試法)、GB/T20944.2-2007(紡織品抗菌性能的評價第2部分：吸收法)等。定量測試方法的優(yōu)點是定量、準(zhǔn)確、客觀,缺點是時間長、費用高。下面介紹一下常用的紡織品定量測試方法。

　　2.3.1AATCC Test Method 100試驗法

　　該法于1961年由美國紡織印染協(xié)會標(biāo)準(zhǔn)委員會提出,1965、1981年修訂后基本定型。該法提出時間較早、影響較大,能定量地檢測試樣的殺菌能力和抑菌能力。原理為:在待測試樣和對照試樣上接種測試菌,暴露一定時間后分別加入一定量中和液,強烈振蕩將試樣殘存活菌洗出,以稀釋平板法測定洗脫液菌濃度,與對照樣比較,計算抗菌織物上細菌減少的百分率。此方法是計算抗菌紡織品的殺菌率。缺點是一次試驗的檢體不能太多,且花費時間較長;對于非溶出型試樣,不能進行抗菌性能評價;沒有詳細規(guī)定中和溶液的成份;而且菌液中營養(yǎng)過于豐富,與實際穿著條件相差太大;容器太大,不易操作。

　　2.3.2 J ISL1902-8(1998)定量試驗法

　　日本學(xué)者對美國AATCC100法提出的改良方法,如菌數(shù)測定法、細菌增殖抑制試驗法、瓊脂平板法、改良細菌增殖抑制試驗法、改良的AATCC100試驗法等,依此日本工業(yè)標(biāo)準(zhǔn)委員會對JISL1902-1990標(biāo)準(zhǔn)進行修訂,制定出了JISL1902-1998標(biāo)準(zhǔn)。此方法計算抗菌面料抑菌活性值。

　　2.3.3ASTM E 2149—2001試驗法

　　ASTME 2149—2001是一種振蕩測試法,測試操作比吸收法簡單,是目前較為理想的測試方法。振蕩法是在一定液體中接種細菌,對于試樣的吸水性要求不高,對于纖維,不論是粉末狀或羽絨羽毛,或凹凸不平的織物,任意形狀的試樣都能應(yīng)用,且對非溶出型和溶出型抗菌織物的測試都非常適用。該測試方法不僅可以測試織物,還可以測試粉狀和顆粒狀材料,以及其他表面處理固體材料。

　　2.3.4 GB/T 20944.2-2007紡織品抗菌性能的評價

　　第2部分：吸收法

　　此標(biāo)準(zhǔn)是國內(nèi)新推出的紡織品抗菌性能定量測試方法，測試原理是將試樣與對照樣分別用試驗菌液接種。分別進行立即洗脫和培養(yǎng)后洗脫，測定洗脫液中的細菌數(shù)并計算抑菌值或抑菌率，以此評價試樣的抗菌效果。

　　2.3.5 ISO 20743-吸收法

　　ISO20743是國際標(biāo)準(zhǔn)化組織首次發(fā)布的紡織品抗菌性試驗方法。該方法適用于服裝、纖維填料、紗線、服裝材料和家庭裝飾產(chǎn)品等各類紡織品，同時也適用于添加各類型抗菌劑(有機、無機、天然和人工制造的抗菌劑)的抗菌整理，以及內(nèi)嵌、后整理和嫁接等各種形式的抗菌整理工藝。該標(biāo)準(zhǔn)主要參照了現(xiàn)有的抗菌定量分析法(如AATCC100，JISL1902)、抗菌定性分析法(如SNV195920，AATCC147)和抗霉菌評定法(如BS6085，AATCC30，SNV195921)等相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)。

　　3.影響紡織品抗菌測試方法中的關(guān)鍵因素

　　本文主要針對定量測試方法中的燒瓶振蕩法和吸收法做介紹。

　　3.1影響燒瓶振蕩測試效果的關(guān)鍵因素影響燒瓶振蕩法測試結(jié)果的關(guān)鍵因素包括試驗菌種、洗滌劑、洗滌方法、測試參數(shù)以及抗菌效果的判定等。

　　3.1.1試驗菌種

　　即使是使用同屬一個菌種的微生物,但如果來源不同,對抗菌整理加工樣品的敏感性也有差異,測出的抗菌值也就不同。所以,測定時盡量使用標(biāo)準(zhǔn)菌株。細菌的生長都有一定的規(guī)律性,一般可分為:遲緩期、對數(shù)增長期、穩(wěn)定期和衰退期等四個生長期。

　　不同細菌的各個生長周期長短不一。如紡織品抗菌面料檢測時常用細菌“金黃色葡萄球菌”繁殖速度比大腸桿菌、肺炎桿菌要慢得多。接種不同時期試驗菌(即細菌的活性不同)得出的結(jié)果也有所差異。

　　3.1.2洗滌劑、洗滌方法

　　除非是一次性用品或根據(jù)實際用途不需要洗滌的試樣,一般在測試樣品前處理時都要先洗滌一次,一是為了去除織物上的灰塵或雜質(zhì),二是消除過量使用的抗菌劑。

　　洗滌試驗采用何種洗滌劑,以及是否已將殘留洗滌劑清洗干凈,對結(jié)果的影響很大。因此,對洗滌程序及洗滌劑要進行標(biāo)準(zhǔn)化,不然,不同測試單位的試驗數(shù)據(jù)就會缺乏可比性。

　　3.1.3測試參數(shù)

　　溫度是影響微生物生長的一個重要因素。溫度過低,細菌就會停止生長;當(dāng)溫度升高時,細胞內(nèi)的化學(xué)反應(yīng)和酶生化反應(yīng)速率均較快,生長速率加快。大部分細菌屬于嗜溫微生物,適生長溫度在37℃左右。細菌的繁殖受溫度的影響非常大,所以,對溫度的考慮是不可缺少的。

　　紡織品抗菌面料測試方法中,除了《抗菌針織品》行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)將樣品上菌液培養(yǎng)溫度設(shè)定為(24±1)℃,其余皆為37℃。為避免試驗過程中溫度差異對細菌生長產(chǎn)生的影響,使各標(biāo)準(zhǔn)間具可比性,應(yīng)統(tǒng)一測試溫度。接種菌液濃度、接種菌活性、接種菌營養(yǎng)水平、樣品與菌液接觸時間的培養(yǎng)方式及培養(yǎng)時間等,皆對測試結(jié)果有影響。因此,規(guī)定統(tǒng)一的測試參數(shù),可使實驗室內(nèi)和各實驗室間測試結(jié)果具有重演性和可比性。

　　3.1.4抗菌效果的判定

　　目前,抗菌結(jié)果的表示有百分率和對數(shù)值兩種。百分率易于理解,但抗菌差異不明顯。如90%、99%、99.9%、99.99%、99.999%……百分率數(shù)值上看似乎差一點點,但是小數(shù)點后多一個9,實際數(shù)值就要相差10倍,而且測試報告上一般只保留小數(shù)點后一位數(shù),因此,抗菌差異顯示不出。況且,細菌是以幾何級數(shù)增長的,因此,用百分率來表示并不合理。用對數(shù)值則可分別表示為1、2、3、4、5,讓人一目了然地了解其抗菌差異,但是不易被外行人士理解。

　　考慮到環(huán)境和安全因素,不可片面追求過高的抗菌效果?？咕椢锎蠖鄶?shù)與人體皮膚直接接觸,而且需多次洗滌,應(yīng)保證其安全性和持續(xù)性。臺灣地區(qū)標(biāo)準(zhǔn)CNS14945《一般用途紡織品抗菌面料性能評估》的適用范圍備注中規(guī)定,在測試抗菌性能之前,申請者必須附上抗菌劑的皮膚刺激性(pH值<2)或過敏性(無過敏反應(yīng))的動物試驗報告,以及產(chǎn)品中添加物之經(jīng)口急性毒性報告—小鼠>1000 mg/kg無死亡和異常現(xiàn)象的認(rèn)證實驗室報告正本,或是原料廠商提供的第三方檢驗報告副本及保證書。對于無需洗滌或不接觸人體的制品,可降低這方面的要求。所以,有必要根據(jù)實際用途設(shè)定合理的抗菌效果判定值。

　　3.2影響吸收法測試效果的關(guān)鍵因素

　　影響吸收法測試結(jié)果的關(guān)鍵因素包括菌液制備、對照樣、試樣重量以及培養(yǎng)時間等4個關(guān)鍵因素,對于實驗的成功與否起著決定性作用[11]。

　　3.2.1菌液制備

　　菌液制備是抗菌試驗中初始、但又非常關(guān)鍵的一步,直接決定著試驗中細菌生長情況的好壞。目前的制備方法,分別為以美國AATCC 100為代表的兩步法、以日本JIS L 1902為代表的三步法。所謂兩步法,就是分以下兩個步驟培養(yǎng)細菌:

　　步,用接種環(huán)取一接種環(huán)保存的菌種,劃線接種于營養(yǎng)瓊脂平皿內(nèi),并將該平皿在37℃條件下培養(yǎng)一定時間;

　　第二步,從步平皿中挑取一典型細菌菌落,接種于營養(yǎng)肉湯中,并在37℃條件下培養(yǎng)一定時間;然后,就是將第二步中的菌液稀釋至規(guī)定濃度。

　　而三步法則是在兩步法的基礎(chǔ)上再增加一步,即適量采取第二步中培養(yǎng)的菌液,加入到營養(yǎng)肉湯中,也在37℃條件下培養(yǎng)一定時間,后再將培養(yǎng)的菌液稀釋至規(guī)定濃度。

　　在抗菌試驗中,必須是活性較高的細菌才能真實地反映紡織品抗菌面料的抗菌性能。在試驗中,活性的高低一般是根據(jù)對照樣上的細菌在培養(yǎng)前后的增長情況來判斷的。細菌增長得越多,其活性就越高;反之就越低。兩步法與三步法的實驗數(shù)據(jù)表明(如表2所示),三步法使得菌液中的細菌活性大大提高,尤其對于生長活性較差的金黃色葡萄球菌來說效果更加明顯,但對于活性較高的大腸桿菌來說變化不大。三步法避免了使用活性較低的保存菌種風(fēng)險,可保證試驗的重現(xiàn)性,真實反映紡織品的抗菌性能。但連續(xù)的3次培養(yǎng),相對兩步法來說,不僅耗時太長,而且操作煩瑣,對于活性較高的大腸桿菌來說顯得有些多余,因為采用兩步法也能達到三步法的結(jié)果,即只要對照樣上活菌數(shù)的增加倍數(shù)符合要求即可。為了操作簡便,應(yīng)根據(jù)菌種選用合適的方法。

　　3.2.2對照樣

　　在抗菌試驗中,對照樣的選擇極為關(guān)鍵。這是因為計算抗菌效果是以對照樣為基礎(chǔ)的,對照樣上細菌生長情況的好壞,決定著抗菌效果的評價結(jié)果。一些方法選擇了與試樣同一類型、但不含抗菌劑的織物作為對照樣,這主要是為企業(yè)而設(shè)定的,主要用于篩選工藝的比對試驗。而對于市場化的檢測就無法操作了,企業(yè)在送檢時往往提供不出對照樣來。因此,無論是從實驗的可操作性、還是可對比性來看,都應(yīng)當(dāng)選擇一種既有代表性的、又能對大多數(shù)試樣都適用的對照樣。

　　考慮到紡織品抗菌面料一般都是內(nèi)衣、內(nèi)褲、襪子等與人體皮膚接觸較多的純棉紡織品,故在實驗中,選擇了GB 7565287中規(guī)定的紡織品色牢度試驗用棉貼襯織物作為對照樣。在前期試驗時,未對棉貼襯織物洗滌而直接進行的試驗表明,該貼襯織物上的細菌經(jīng)過19 h培養(yǎng)后洗下的液體,按照十倍稀釋法對其活菌進行計數(shù),數(shù)據(jù)嚴(yán)重違背十倍稀釋規(guī)律。

　　3.2.3試樣用量試樣用量的多少對結(jié)果有著顯著影響。這是因為,在對培養(yǎng)后的試樣洗滌其上的活菌過程中,試樣所含有的抗菌劑同時也被洗出。試樣量越多,洗脫下來的抗菌劑就越多。而這些洗下的抗菌劑,會進一步抑制洗滌下來的液體中殘留的活菌的生長,從而使得后的活菌數(shù)減少。試樣用量越多,活菌數(shù)就減少得越多,從而抗菌效果也越好,但這種結(jié)果并不能真實反映紡織品的抗菌性能。因此,統(tǒng)一試樣用量在抗菌試驗中就顯得非常重要。

　　3.2.4培養(yǎng)時間

　　培養(yǎng)時間是指細菌在正常情況下,從生長繁殖到其活菌數(shù)達到大值的時間。理論上,該時間段為18h比較合適。在現(xiàn)行方法中,有選擇18～24 h的,有選擇18±1 h的,還有選擇20±2 h的,基本上都是在18～24 h范圍內(nèi)進行選擇。

　　4.結(jié)論

　　綜上所述，紡織品抗菌測試各標(biāo)準(zhǔn)之間在實驗菌種、實驗儀器、實驗方法和評價方法等方面都有一定的差異。用不同的測試標(biāo)準(zhǔn)得出的結(jié)果也不盡相同。我們應(yīng)在訂單初期盡早和客人確定好抗菌的測試方法，以免給客人造成不必要的損失。

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